山羊痘病毒的电子显微镜观察

发布: 2010-04-03 |  作者: 龙沛然,周卫国,覃敏,廖红芬 |   来源: 《中国兽医杂志》

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    山羊痘是国际动物卫生组织列为A类病种之一的一种具有高度接触传染性的发热性、全身性疾病。该病以体温升高(一般40℃以上),全身性丘疹或结节,水疱,临床主要以侵害口、鼻、眼、乳房乳头、阴囊、会阴、尾根内侧及四肢内侧出现痘疹合并内脏实质性病变(特别是肺),乃至死亡为特征。

 

   在我国西北部地区曾有过此病的流行。2002年2月在东北锦州市郊曾有过暴发,内地比较少见,2002年10月国家农业部办公厅发文指示,近年来部分省(市,区)发生了羊痘疫情,并有逐步蔓延扩散的趋势。各地要严格按照“早,快,严,小”的原则,采取措施,有效控制疫情。正在此时云南省不同区域的个别村镇也发生了该病,病羊的临床表现为初期口腔流涎,鼻腔流脓鼻涕,眼角有白色分泌物,体温40.2℃以上,饮食减少,而后逐渐在嘴唇、眼周、面部、乳房、腹部及四肢内侧,尾根内侧等无毛或少毛部出现蚕豆样大小不等的水疱疹;后期水疱破溃形成棕黑色痂皮,部分形成丘疹或结节,结节破溃后出现化脓症状,部分病例直至死亡(流行病学资料另文按级上报)。为了尽快确诊是否为此病,疫区送样到我所用电镜进行病毒形态观察,报告如下。

 

1  材料与方法

 

1.1 试剂  (1)磷钨酸(分析纯)中国菱湖化工试剂厂生产,上海化学试剂站经销。(2)Epon812系列试剂购至北京化学试剂公司。

1.2  样品  采自云南省某市某村和某县某村病羊濒死前水疱疹水疱液及结痂的水疱痂皮各4份。

 

1.3  水疱液及水疱痂皮  研磨液上清分别用电镜常规负染。部分水疱痂皮作电镜常规Epon812包埋,超薄切片,双染后在日立H6002型透射电子显微镜下观察。

 

2  结果

2.1  两地第1次送样仅作负染,在水疱液和水疱痂皮研磨液负染片中均可见到大量有囊膜的圆形或杨梅状不规则形的病毒颗粒,大小约300~350 nm左右,还可见脱落的小片状壳粒,未看到典型的羊痘病毒的核心结构,一时难以确诊为羊痘

 

图1  初始样品负染33 148片中圆形有囊膜毒或杨梅状羊痘病及脱落的小片状壳粒(略)。

 

2.2  要求重取新鲜样品再作进一步观察。第2次样品中(负染样)就可看到大量圆形、卵圆形或似砖形样、有囊膜及典型的痘病毒核心结构。病毒颗粒大小约300~350 nm。有的形态不清未见核心,病毒表面凹凸不平,似小颗粒或短小管状结构物,当看到典型核心结构之后确诊为痘病毒感染确实较快、较准

2.3  之后经超薄切片,动物回归试验证明,临床表现相互一致,电镜观察结果也同前,并可看到典型的羊痘病毒颗粒及核心,核心有鞋底状、棱状、苯环状不等。

 

3  分析

3.1 首次所见病毒颗粒较文献报道的要大30~50nm,初始形态为圆形,在图1片中发现有小片状脱落壳粒及圆形核心,加之形态较大,是最易误诊的问题,对确诊为羊痘难以定论。以后的样品为什么又能发现典型核心结构的病毒呢?

3.2  主要原因是所采样品时间不同,病毒在不同时间复制出不同形态,结构就有所不同,或是所附的寄主细胞膜不同所致。

 

3.3  要想很快确诊为山羊痘,就应同时采集不同发病时间的样品,必须多观察几份,直到发现典型形态结构时方能定论。除此之外,就是采用快速包埋法,进行超薄切片观察,一般在切片中最易发现典型结构。 

 

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